今天跟大家一起学习的是冰冻切片制片的影响因素，本文由普拉特泽生物根据承接的多例动植物冰冻切片代做实验总结分享。冰冻切片因其方便、快捷的特性，除了实验室内常用来观察样本外，在临床手术中的应用非常广泛。冰冻切片可以在手术过程中观察肿瘤的性质，对下一步手术步骤起决定性作用，所以冰冻切片的结果准确性要求较高，本文旨在为大家规避各种影响冰冻切片结果的各种因素，最大限度的提高实验的准确性，给到前端正确可信的判断。

        前几篇我们学习了冰冻切片的实验介绍、实验步骤、注意事项，大家可以独立的完成冰冻切片的操作了吗？记得温故而知新，随时回去复习哦~

冰冻切片……………………………………实验介绍

冰冻切片……………………………………操作步骤

冰冻切片实操………………………………注意事项

        好了话不多说上干货，我们从组织取材、冷冻时间与温度、切片染色、冰晶形成、切片皱缩或卷缩、组织块脱落对冰冻切片结果的影响及原因，希望大家尽量避免以及注意对结果的分析：

        1、组织取材对制片的影响

        组织取材大小：组织块大小要适宜，冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围时，易致切片不全，一般情况下，冰冻切片的组织大小为1.5*1.5 cm厚2 mm。（卵巢及脂肪组织可稍微大些）组织块过大，切片时阻力过大，易产生皱折、刀痕，组织易崩碎，增加制片难度，影响观察诊断。

        组织内含过多的脂肪或坏死组织：脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，脂肪或坏死组织还比较软，从而影响切片的完整性和检测发出的时间。

        组织块过冷：组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张完整的切片。

        组织块冷冻不均匀：组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氨量不足的情况下，可产生此现象。

        2、冷冻时间、温度对制片的影响

        根据组织块的大小性质确定冷冻时间一般13~17 s(使用液氮者)，若组织较大或脂肪组织时间可适当长些，而甲状腺、脑组织和淋巴组织等冷冻的时间相对要短些。（参考上文各组织冰冻切片的适宜温度）
        3、染色对制片的影响

        尤以细胞核的染色最为关键，在寒冷的冬季，室温过低时，影响核的着色，可适当加温，用以增色；苏木毒的酸碱应适宜 ，经常观察其染液的n值，过碱时应及时更换，盐酸酒精分化活度，时间控制到位，否则易造成核着色不佳，染色质不清晰，影响诊断的准确性。

        4、冰晶的形成对制片的影响

        常见原因：取决于组织含水量的大小，尤以组织细胞水肿，淋巴结，纵隔肿瘤，卵巢肿瘤为甚，送检取材过程中接触水源，同是造成冰晶形成的原因。

        解决方法：使用液氮时间上控制到位，保证一次冻透标本1.组织送检取材时，尽量避开水源2.如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻。

        5、切片皱缩或卷缩对制片的影响

        常见的原因：①刀锋变钝。②防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。③防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。④组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。

        解决方法:①注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。②保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。③调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷板次刀锋前0.2 mm左右。包埋组织应完全，没法切片者再滴加包埋胶。

        6、组织块脱落对切片的影响。

        冷冻切片一般要求在30min内发出病理报告，以便手术医生能尽快选择手术方式。

        常见原因:①组织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组织失去支撑作用，染色时组织容易脱落，②因际液浓度过低。③载坡片不干净。④切片太厚。

处理方法:①避免组织内带有坏死组织。②定期更换固定液。 股每周更换一次，例数较多者，适当增加次数。③保持载玻片干净，平时应将玻片盖好，防止就发申或其它异物的污染。④调好切片的厚度，切片厚度以5~7μm为宜。

  对于冰冻切片结果影响的因素我们就全部说完啦，希望大家在冰冻切片制片时都能直面、规避这些影响，需要代做冰冻切片、或有更多实验问题的欢迎留言探讨哦。