一、TTC染色实验简介与原理

实验简介：TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。染色要在37°C避光条件下进行，它是评价脑缺血损伤常用的指标。

实验原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。

TTC染色实验意义：通过TTC染色观察梗死病变及梗死体积。

二、TTC染色结果分析

动物组织：非梗死区染为红色，梗死区呈灰白色，红色区与灰色区之间为缺血区。

植物样本：活组织呈玫瑰红色，死组织及无生命力的组织不着色。

三、TTC染色实验步骤（样本与实验目的不同步骤均有不同）

step1：取脑。可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。

Step2：-20°C冰箱中速冻20分钟左右，便于切片

Step3：切片。每隔2mm切一片，第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。

Step4：将切片置于TTC染色液中，常规浓度为2%，也有用1%或更低浓度的。

Step5：用锡箔纸盖住后，放入37C温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板，再滴入TTC，覆以圆形盖玻片使均匀染色

Step6：将染色的脑片标号，设定标尺并拍照；如需计算面积或体积，需借助图像处理软件进行计算

四、TTC染色常见问题分析及原因解析

1、染色过深或过浅

染色时间、分化时间过长或不够，染色过程可在镜下控制，适当调整时间。

2、 切片破碎

取材不当，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。或速冻时间不够，切片时组织过软，适当延长冷冻时间。