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ALP/碱性磷酸酶染色实验原理与步骤

2022-01-23 11:18:44

来源/作者:普拉特泽-病理染色技术平台


一、ALP染色实验目的与原理

实验目的:使用ALP染色试剂检测组织中的碱性磷酸酶活性。

实验原理:碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.2~9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸不萘酚,后者不偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠

 

二、ALP染色临床意义

临床上碱性磷酸酶染色法对以下疾病有鉴别意义:类白血病反应显著增高,慢性粒细胞白血病 (无继发感染) 显著减低;急性细菌感染伴白细胞增多时,显著升高,病毒性感染时多正常;真红细胞增多症升高,继发性红细胞增多者则正常,而阵发性血红蛋白尿症则减低;再生障碍性贫血患者明显升高,淋巴细胞白血病往往升高,但该病成熟的中性粒细胞较少,较难判断。

 

三、ALP染色实验步骤

Step1:石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

Step2:冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中4°C固定2-5分钟。

Step3:切片入试剂A,37C孵育。冰冻切片5-15分钟;石蜡切片2-12小时,流水冲洗2分钟后入蒸水。

Step4:入试剂B,37C, 5分钟。

Step5:流水冲洗5分钟后入蒸馏水。

Step6:试剂C用蒸馏水50倍稀释,即配即用。

Step7:切片入试剂C稀释液2分钟。

Step8:流水冲洗10分钟后入蒸馏水。

Step9:冰冻切片用甘油明胶封片;石蜡切片常规脱水,透明,树胶封片。


 

 【例:小鼠骨组织ALP染色】