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【质粒介绍】分解篇5-蛋白荧光标签

2021-09-06 11:05:19

来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包

今天我们要为大家讲解的就是蛋白标签(protein tag)中的最后一部分,荧光蛋白。

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荧光蛋白在某种定义下可以说是革新了生物学研究——运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动,可以标记表达蛋白,可以进行深入的蛋白质组学实验等等。特别是在癌症研究的过程中,由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动,比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生。


绿色荧光蛋白(GreenFluorescent Protein,简称GFP )

在美国西北海岸所盛产的一种名为Aequorea victoria的水母中发现的一种可以发出绿色荧光的蛋白质。GFP最早是在1962年由日本科学家下村修发现,由238氨基酸组成的单体蛋白质,蛋白分子约为27kD

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eGFP

eGFP标签蛋白,是增强型绿色荧光蛋白eGFP,激发波长为488nm,发射波长为507nm,其是由野生型绿色荧光蛋白GFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。相对于GFP,eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

不用破碎组织细胞和不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针。

其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。

同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。

其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选。


eYFP

eYFP标签蛋白为增强型黄绿色荧光蛋白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为527nm,其是由野生型黄绿色荧光蛋白YFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。


eCFP

eCFP标签蛋白为增强型青色荧光蛋白eCFP,激发波长为433nm453nm,发射波长为475nm501nm,其是由野生型青色荧光蛋白CFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。



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在本期同步发出的文章中

还有【质粒介绍】系列的最后一篇:

【质粒介绍】分解篇6-载体推荐

很实用,记得去看噢~

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