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「质粒介绍」分解篇1-启动子

2021-08-19 15:28:29

来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包

在之前的文章中小编介绍了质粒图谱:如何看质粒图谱!


其中简要的介绍了下图谱包含的四大要素

1.复制起点 2.筛选标记 3.多克隆位点 4.其他元件。


接下来的时间,小编会对质粒中各个要素进行单独的分析讲解,一共有6篇,记得持续关注噢~希望能对小伙伴们的科研实验之路提供帮助。

「质粒介绍」分解篇1-启动子


今天我们要为大家讲解的就是启动子(Promoter)


启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列,它含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列,多数位于结构基因转录起始点的上游,启动子本身不被转录。

启动子作为RNA聚合酶和一些转录因子结合的靶序列,对转录起始有调节和控制作用,决定着基因表达过程的起始以及在什么条件下开始。因此启动子的识别与分析是表达调控研究的前提和基础。


1.启动子的基本结构

原核生物启动子的结构模型原核生物启动子( Prokaryote promoter)长度一般为20bp-200bp左右,细菌启动子常由四部分组成: CAT序列,转录起始位点;Pribnow框,即转录起始位点,有一段共有序列TATAAT,是RNA聚合酶的结合位点,启动子的强度很大程度上是由这一序列的核苷酸构造所决定;Sextama框,其共有序列是TTGACA,是RNA聚合酶的识别位点;间隔区,两段长为6个核苷酸保守序列,被长为非特异性的17-19个核苷酸序列所分隔。

真核生物启动子结构模型真核生物启动子( Eukaryotic promoter) 主要有三类,分别对应于细胞内的三种RNA聚合酶与相关蛋白质。其中II类启动子即RNApolII 启动子序列的基本结构特征是,位于转录起点上游25-30区有一与原核生物的Pribnow框相似的富含AT碱基对的TATA盒(Hogness盒),TATA盒有7对共有碱基序列: 5'TATA (A/T) A (A/T)3',其功能与原核启动子的Pribnow框也相似,决定RNA聚合酶II的位置,控制转录起始的准确性及效率,此为核心元件。大多数真核基因启动子上游距帽位点约80-220 bp处,都存在上游原件,其中有CAAT 盒、GC盒等,它们的保守序列与结合蛋白因子也各不相同,可以大大提高的基本启动子的低水平转录活性。


2.启动子的分类

根据对转录水平控制的程度,可以将启动子分为弱启动子和强启动子:参照转录

模式,启动子又可以分:


①组成型启动子(constitutive promoter), 该类启动子能够调控结构基因的表达基本恒定在一定程度上,在不同部位或组织表达水平差异不明显。


②组织特异启动子(tissue. specific pro. moter),该类启动子的调控作用使得基因往往只在某些特定的器官或组织部位表达,且表现出发育调节的特性。


③诱导型启动子(inducible promoter), 即在某些特定的物理或化学信号刺激后,基因转录水平在该类型启动子调控下大幅度地提升。目前已经分离了众多启动子如热诱导表达基因、光诱导表达基因、创伤诱导表达基因、真菌诱导表达基因和共生细菌诱导表达基因启动子等。而这些诱导型启动子又分为人工构建的诱导型启动子,天然诱导型启动子,阻遏型启动子系统和激活型启动子系统。


3. 特异性启动子

特异性启动子是能够使基因进行转录的一段DNA序列。启动子可以被RNA聚合酶辨别,并开始转录。启动子常位于目的基因上游100-2000bp位置处,是质粒非常重要的一个元件,它决定着目的基因可以在何种细胞中进行表达,也决定蛋白质的表达量。  

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常见启动子表(真核生物)

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启动子

主要用途

RNA转录本

描述

表达

备注

CMV

常规表达用

mRNA

人类巨细胞病毒来源的强哺乳动物表达启动子

组成型

可能包含一个增强子,在某些细胞中会沉默

EF1a

常规表达用

mRNA

人延长因子来源的强哺乳动物表达启动子

组成型

表达水平十分稳定,与细胞类型无关

SV40

常规表达用

mRNA

猿猴空泡病毒40来源的哺乳动物表达启动子

组成型

可能包含一个增强子

PGK1 (人/小鼠)

常规表达用

mRNA

磷酸甘油酸酯激酶基因来源的哺乳动物启动子

组成型

广泛表达,但可能因细胞类型而异。由于甲基化或脱乙酰作用,倾向于抵抗启动子下调。

Ubc

常规表达用

mRNA

人类泛素C基因来源的哺乳动物启动子

组成型

顾名思义,该启动子无处不在

human beta actin

常规表达用

mRNA

β-肌动蛋白基因来源的哺乳动物启动子

组成型

无处不在,鸡的启动子常用与启动子杂交

CAG

常规表达用

mRNA

强杂交哺乳动物启动子

组成型

包含CMV的增强子,鸡的beta actin启动子和兔的beta-globin剪接受体

TRE

常规表达用

mRNA

四环素响应元件启动子

被四环素或者类似物诱导

通常有本底表达

UAS

常规表达用

mRNA

Gal4结合位点的果蝇启动子

特异的

需要Gal4基因来激活启动子

Ac5

常规表达用

mRNA

果蝇Actin 5c 基因来源的强昆虫启动子

组成型

果蝇表达系统的常用启动子